细胞周期检测

细胞周期检测相关说明

一、应用简介

细胞周期可划分为间期与分裂期两大阶段，其中间期进一步细分为DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）和DNA合成后期（G2期）。部分细胞在分裂完成后会暂时脱离细胞周期，停止分裂并执行特定的生物学功能，此阶段称为G0期。由于细胞周期不同时相的DNA含量存在差异，正常细胞中，G1/G0期细胞具有二倍体DNA含量（2N），G2/M期细胞具有四倍体DNA含量（4N），而S期细胞的DNA含量则介于二倍体与四倍体之间。

二、技术原理

碘化丙啶（PI）可与细胞内DNA特异性结合，且其荧光强度与DNA含量直接相关。基于这一特性，采用PI染色结合流式细胞术检测细胞内DNA含量，能够精准区分细胞周期的G1/G0期、S期和G2/M期。

三、实验方法

细胞周期检测（具体操作流程可参考常规流式细胞术实验规范）

四、注意事项

细胞周期检测过程中严禁洗涤操作。与蛋白染料和细胞的牢固结合不同，DNA与PI的结合处于游离态与结合态的松散平衡状态，稳定性较差。洗涤会导致染料大量流失，降低核酸特异性荧光强度，进而造成检测数值偏低。

细胞周期检测需全程关注样本处理、染色及数据分析的各个环节，以保障检测数据的准确性。具体注意要点如下：

1.  样本制备：需避免细胞损伤和聚集。消化细胞时，胰酶作用时间不宜过长；终止消化后，应轻柔吹打制备单细胞悬液，防止细胞粘连影响流式细胞仪的检测结果。固定环节建议使用预冷的70%乙醇，缓慢逐滴加入细胞悬液中，置于4℃环境固定过夜，以避免细胞团块形成。

2.  染色过程：PI染色需全程避光，染色时间控制在30分钟左右，同时需加入RNase去除RNA干扰，确保PI仅与DNA特异性结合。若采用BrdU标记法，需严格控制BrdU的加入浓度和时间，避免出现标记不足或过量的情况。

3.  检测与分析：检测前需优化流式细胞仪的激光功率、电压等参数，并设置合理阈值以有效区分细胞碎片；数据分析时，需通过软件精准圈门，防止将亚二倍体峰误判为G1期。实验过程中应设置空白对照、同型对照及阳性对照，以排除背景信号干扰；同时需进行多次生物学重复，减少实验误差，确保细胞周期检测结果的可靠性。