iTRAQ定量蛋白质组学

定量蛋白质组学技术服务介绍

iTRAQ 定量蛋白质组学

产品介绍

iTRAQ 定量蛋白质组学以蛋白质这一基因翻译产物为核心研究对象，依托高通量检测技术，可全面、快速地获取细胞、组织或完整生物个体的蛋白质组成、表达丰度及修饰状态等关键信息。该技术能够用于解析蛋白质间的相互作用与调控网络，助力研究人员从整体层面揭示蛋白质的组成规律与功能调控机制。目前，其应用范围已覆盖基础生物学研究、农业育种、临床医学等多个领域。主流定量蛋白质组学技术主要包括基于高分辨质谱的标记技术（如 SILAC、iTRAQ/TMT）与非标记技术（label-free）两大类。

产品优势

高通量检测：可同时对 8/10 个样本开展平行分析，大幅提升实验通量与研究效率。

适用范围广泛：能够对各类蛋白质进行高效鉴定，不受蛋白质种类、分子量等因素限制。

检测灵敏度高：具备较低的检测下限，可精准捕获低丰度蛋白质的表达信息。

定制化信息分析：提供专业的个性化数据分析服务，满足不同研究场景的深度需求。

SILAC 定量蛋白质组学

产品介绍

细胞培养氨基酸稳定同位素标记技术（SILAC，Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture），由丹麦 Mann 实验室的 Ong 等人于 2002 年在氨基酸质量标签（AACT）技术基础上改进而成，并首次应用于定量蛋白质组学研究。该技术为全面、系统地开展复杂哺乳动物细胞蛋白质组的定性与定量分析，提供了高效且可靠的解决方案。

SILAC 技术适用于细胞与动物的体内标记，具有系统误差小、定量结果准确的显著优势。同时，该技术能够精准捕捉蛋白质表达的时效性变化，助力研究人员筛选差异表达蛋白，从而更深入地解析外界刺激下的生物作用机理。

产品优势

高通量鉴定定量：单次实验可同时完成数百至数千种蛋白质的鉴定与定量分析。

降低实验误差：多个样本混合后可同步进行分离、酶切与鉴定操作，后续实验对各样本的影响保持一致，有效减少实验操作与仪器设备引入的定量偏差。

标记效果稳定高效：作为体内标记技术，标记过程不受裂解液成分干扰，标记效率可达 99%；可适配 DMEM、DMEM-F12、1640 等多种培养基，满足不同细胞的培养与标记需求。

灵敏度高且样本需求量低：检测灵敏度优异，仅需少量样本即可完成实验分析。

iTRAQ 定量蛋白质组学实验注意事项

一、样本制备与处理

完整性与纯度把控：样本采集后需立即置于 - 80℃低温环境保存，严禁反复冻融，防止蛋白质发生降解。组织匀浆或细胞裂解环节需选用高效裂解液，确保蛋白质充分释放；同时通过离心或过滤等方式去除核酸、脂类等杂质，保障蛋白质样本纯度。

定量准确性控制：采用 BCA、Bradford 等方法对蛋白浓度进行精准测定，将测定误差控制在 5% 以内，避免因蛋白浓度偏差导致标记效率不均，影响后续实验结果。

二、标记反应控制

标记试剂活化：iTRAQ 试剂需在乙腈等无水有机溶剂中充分溶解，避免水分破坏标记基团活性。标记前需使用尿素或盐酸胍对蛋白样品进行变性处理，并通过烷基化反应封闭巯基，防止二硫键形成干扰标记反应。

反应条件优化：标记反应温度需控制在 37℃，反应时间不少于 2 小时，体系 pH 维持在 8.0-9.0，确保蛋白质氨基与标记试剂充分结合。反应结束后，需通过脱盐柱去除未结合的游离试剂，避免对后续质谱检测造成干扰。

三、分离与检测环节

色谱 - 质谱参数设置：液相色谱分离需选用高分辨率 C18 反相色谱柱，梯度洗脱时间建议不少于 90 分钟，保证肽段的有效分离。质谱检测时需优化喷雾电压、碰撞能量等关键参数，采用数据依赖采集（DDA）模式，提升蛋白质鉴定的深度与准确性。

生物重复与质量控制：实验需设置至少 3 次生物学重复，每批实验需加入各样本等比例混合的质控样本，实时监测仪器稳定性与实验重复性，降低技术误差对定量结果的影响。

四、数据分析要点

采用 MaxQuant、Proteome Discoverer 等专业软件进行肽段匹配与定量分析，分析过程中需注意校正同位素标记效率偏差。通过火山图、热图等可视化手段筛选差异表达蛋白，结合 GO、KEGG 等权威数据库开展功能注释与富集分析，有效排除假阳性结果，确保分析结论的可靠性。