细胞增殖

细胞增殖检测技术应用简介

细胞增殖是生物体的核心生命特征之一，细胞主要通过分裂的方式实现增殖过程。对于单细胞生物而言，细胞分裂是产生新个体的繁殖途径；而多细胞生物则依靠细胞分裂生成新细胞，以此补充体内衰老、损伤或死亡的细胞，维持机体正常的生长发育与稳态平衡。

细胞增殖常用检测方法

MTT、CCK-8、BrdU、EdU 等技术是目前广泛应用的细胞增殖检测手段，这些方法从细胞代谢活性和DNA 合成水平两个核心维度，精准反映细胞的增殖状态。其中，MTT 与 CCK-8 的检测原理一致：活细胞线粒体中的脱氢酶可将检测试剂还原为甲瓒，死细胞因代谢活动停止则不具备该功能。BrdU 和 EdU 的检测则基于 DNA 合成的特异性：两种物质可在细胞增殖的 S 期（DNA 复制期）替代胸腺嘧啶（T）渗入新合成的 DNA 链，后续通过与荧光染料的特异性结合反应，即可定性定量检测细胞的 DNA 复制活性。

MTT 技术原理

活细胞线粒体中含有的琥珀酸脱氢酶，能够催化外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），并沉积于细胞内；死细胞因线粒体功能丧失，无法完成这一还原过程。实验中，可采用二甲基亚砜（DMSO）溶解细胞内的甲瓒结晶，随后使用酶标仪在 490nm 波长下测定其吸光度值（OD 值）。在一定的细胞数量范围内，甲瓒结晶的生成量与活细胞数量呈正相关关系。研究人员可根据测得的 OD 值判断活细胞数量：OD 值越高，表明细胞活性越强；若应用于药物毒性检测，则 OD 值越高意味着药物对细胞的毒性越小。

实验方法

细胞增殖实验常见问题及注意事项

一、 实验操作常见问题

细胞铺板不规范：铺板密度设置不合理，细胞分布均匀度差，易导致组内数据偏差过大。

实验分组设计不严谨：分组逻辑不清晰、对照设置缺失或不合理，无法有效支撑实验结论。

检测时间点选择不当：未结合细胞生长周期规律设置时间点，难以精准捕捉细胞增殖的关键变化阶段。

试剂加样操作不规范：MTT 或 CCK-8 试剂添加环节的操作标准不明确，易引发加样量误差或反应条件不一致。

干扰因素控制不足：高浓度血清或带颜色的药物会干扰检测孔吸光度值的测定，造成结果假性偏差。

边缘效应影响：培养板边缘孔水分挥发速度较快，易导致孔内药物浓度浓缩，影响细胞生长状态与实验结果。

二、 实验全流程关键注意事项

（一） 样本处理与复苏

样本处理的规范性直接影响细胞活性与实验准确性。原代细胞取材需严格遵循无菌操作规范，取材后需迅速转移至适配培养基中，减少细胞暴露时间，避免细胞受损；传代细胞复苏时，需采用快速解冻法，降低冰晶对细胞造成的机械损伤，复苏后要及时更换新鲜培养基，彻底去除冻存保护剂，防止其对细胞产生毒性作用。

（二） 细胞培养与维护

需根据细胞的生物学特性选择专属适配培养基，并定期更换培养基，保证细胞获得充足营养供应，同时避免代谢废物过度积累。严格控制细胞接种密度，密度过高易引发接触抑制，密度过低则会影响细胞正常生长增殖。全程遵守无菌操作要求，实验耗材与试剂使用前需彻底灭菌，杜绝微生物污染。精准把控胰酶消化时间，避免消化过度导致细胞裂解，或消化不充分造成细胞难以分离。

（三） 细胞冻存要点

冻存细胞时需采用逐步降温的操作流程，配置冻存液时需添加合适的保护剂，以此维持细胞在低温环境下的活性，为后续实验储备高质量的细胞样本。