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DNA提取技术介绍
一、应用简介
DNA作为遗传信息的核心载体，是最重要的生物信息分子，也是分子生物学研究的核心对象。因此，DNA提取是开展各类分子生物学实验的基础前提，脱离高效的DNA提取工作，后续实验将无从谈起。
DNA提取过程需严格遵循三大核心原则：1. 依据不同研究需求，保障DNA结构的相应完整性；2. 最大限度排除蛋白质、多糖、RNA等其他大分子成分的污染；3. 确保提取样品中不含对酶活性有抑制作用的有机溶剂及高浓度金属离子。以下结合不同研究对象，梳理对应的DNA提取方法。
二、技术原理
原核生物的基因呈连续无间隔状态，可直接通过限制酶切割DNA获得目的基因，经PCR扩增后即可得到大量目的基因。
真核细胞核基因组DNA编码基因、感染真核细胞的DNA病毒基因组编码基因及反转录病毒基因组编码基因，统称为真核基因。真核基因调取是指以动物组织或细胞为模板，提取获得cDNA（互补DNA）或gDNA（基因组DNA），并从中扩增基因、启动子等功能元件；也可将基因片段或各功能元件片段亚克隆至各类载体中。
三、实验方法
原核生物DNA提取流程
2. 真核生物DNA提取流程
四、送样注意事项
1. DNA样品需保存在TE缓冲液或超纯水中，置于1.5mL或2.0mL灭菌无黏附离心管内，并用封口膜密封；管壁需用记号笔或标签清晰、准确标注样品名称。
2. 为保障实验顺利推进，建议预留1~2份样品备份，避免因部分样品降解导致重新取材、制备或送样，延误实验进度。
3. 所有样品均需附带一份《样品信息单》，详细填写样品编号、样品状态（如DNA液体、干粉、组织叶片、血液、肌肉等）、是否允许耗尽等信息；若为DNA液体，还需补充标注浓度、体积、制备时间、电泳图等关键参数。信息单需随样品一同寄出，同时将电子版发送至销售人员邮箱。
4. 运输过程优先采用干冰冷藏，夏季高温环境需适当增加干冰用量，确保样品全程处于低温稳定状态。
五、关键操作规范
DNA提取需在无核酸污染的洁净环境中精细操作，各环节严格把控，确保核酸的完整性与纯度：
1. 样本预处理：新鲜组织需迅速置于液氮或-80℃冰箱冻存，避免反复冻融导致DNA/RNA降解；血液样本应及时分离血浆，加入抗凝剂抑制核酸酶激活；细菌/细胞样本需充分裂解，其中革兰氏阳性菌需先用溶菌酶处理破坏细胞壁，动物细胞则通过蛋白酶K与去污剂协同作用破坏细胞膜。
2. 裂解过程控制：严格把控试剂用量与反应温度；RNA提取需全程佩戴无RNase手套，使用DEPC（焦碳酸二乙酯）水处理的耗材，杜绝RNase污染；DNA提取需避免剧烈涡旋等产生过大机械剪切力的操作，防止高分子量DNA断裂。
3. 纯化阶段操作：酚-氯仿抽提后需充分离心，吸取上清时避免触碰中间蛋白层；乙醇沉淀DNA/RNA时，采用预冷试剂并置于-20℃或-80℃环境，提升沉淀效率。
4. 后续处理与保存：用70%乙醇洗涤核酸沉淀时需温和操作，防止沉淀丢失；干燥环节避免过度干燥导致核酸变性。提取完成后需立即通过紫外分光光度法或Qubit荧光定量法检测核酸浓度与纯度，同时通过电泳验证完整性；短期保存可置于4℃冰箱，长期需分装后冻存于-20℃或-80℃冰箱，全程避免反复冻融。
5. 质量控制：实验需同步设置空白对照，排除试剂污染对实验结果的干扰。
