流式细胞技术

流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）介绍

一、应用简介

流式细胞技术（Flow Cytometry, FCM）是利用流式细胞仪开展的单细胞定量分析与分选技术。该技术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光技术、电子计算机科学等多领域技术高度发展与综合应用的高技术产物，广泛应用于细胞生物学、免疫学、医学等多个研究与临床领域。

二、技术原理

流式细胞仪的核心工作原理为：使悬浮于液体中的分散荧光标记细胞或微粒逐个通过样品池，同时由荧光探测器捕获荧光信号，并将其转换为分别代表前向散射角、侧向散射角及不同荧光强度的电脉冲信号；经计算机处理后，形成相应的点图、直方图及三维结构图像，进而实现对细胞或微粒的定量分析。

适用于FCM的样本为单细胞悬液，常见类型包括血液、悬浮细胞培养液、各类体液、新鲜实体瘤单细胞悬液及石蜡包埋组织单细胞悬液等。

三、服务内容

1. 细胞表面分子的检测与分析；

2. 细胞内或细胞核内抗原的检测与分析，例如胞内细胞因子、调节性T细胞（Treg，CD4?CD25?Foxp3?）等；

3. 细胞凋亡的检测与分析，常用方法包括PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术（TUNEL）、细胞周期特异性细胞凋亡检测（PI-Annexin-V，PA法）等；

4. DNA含量检测与细胞周期分析，例如药物对细胞周期的影响研究、流式细胞核型分析等；

5. 细胞增殖的检测与分析。

四、流式细胞分选仪基本原理

流式细胞分选仪基于流式细胞术核心原理，在完成细胞分析的基础上，通过对目标细胞所形成的液滴进行电荷标记，利用电场作用使标记液滴发生特异性偏转，从而实现对目标细胞的精准分选与收集。

五、技术特点

1. 分选精准高效：少量细胞分选时，精确度可达99%以上，分选速度快。当前先进的流式细胞仪分选速度可超过25000个细胞/秒，较传统分选速度提升数倍，能大幅缩短实验时间（如原需1天的工作现仅需数小时）。但分选细胞量存在一定限制，一次分离的最大合理量约为10?个细胞；若细胞量超过10?个，分选耗时将超过10小时，且分选后细胞活力会受显著影响。

2. 多参数同步分选：可同时针对多个标志物进行分选，实现正选与负选同步开展。传统流式细胞仪仅能对液滴充正、负电荷，实现两路分选；现有先进仪器可通过调控液滴带电量改变偏转角度，实现多路分选，例如BD的FACSAria流式细胞仪可完成四路分选。

3. 分选维度广泛：分选依据不仅限于细胞表面抗原，还可基于任何可检测的发光度（如细胞体积）或荧光信号差异（如DNA、RNA、蛋白含量，酶活性，特异性抗原等）分离细胞。若能保证流式细胞仪无菌环境，分选后的细胞可用于后续培养或其他分析实验。

4. 成本优势显著：若仅偶尔开展细胞分选实验，采用流式分选更具经济性。实验仅需准备样品与抗体，缴纳相应仪器使用费即可，无需额外购置配套设备。