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HE染色法
苏木精-伊红染色法（简称HE染色法）是目前应用最广泛的常规染色技术。其中，苏木精（hematoxylin）属于阳离子染料，可将细胞核内的嗜碱性物质染为蓝紫色；伊红（eosin）为阴离子染料，能够使细胞质、胶原纤维等成分呈现粉红色。
优质的HE切片是病理医生作出准确诊断的重要前提。作为国内外病理诊断领域普遍采用的常规染色方法，HE切片的质量直接关系到疾病诊断的及时性与准确性。
技术原理
1. 细胞核染色原理
苏木精是一种碱性天然染料，具备使细胞核着色的特性。细胞核内的染色质主要成分为DNA，其双螺旋结构中两条核苷酸链的磷酸基朝向外侧，使DNA双螺旋外侧带有负电荷，呈酸性特质，极易与带正电荷的苏木精碱性染料通过离子键或氢键结合，从而实现染色。由于苏木精在碱性溶液中呈蓝色，因此细胞核最终被染为蓝色。
2. 细胞浆染色原理
细胞浆的主要成分是蛋白质，而蛋白质属于两性化合物，因此细胞浆的染色效果与环境pH值密切相关。当pH值调节至蛋白质等电点（4.7-5.0）时，细胞浆对外不显电性，此时酸性或碱性染料均难以使其染色；若pH值调至6.7-6.8（高于蛋白质等电点），细胞浆会发生酸性电离并带有负电荷，可与带正电荷的染料结合染色，但此时细胞核也会被染色，导致核与浆难以区分。
因此，需将pH值调节至细胞浆等电点以下，通过在染液中添加醋酸使细胞浆带正电荷（阳离子），进而与带负电荷（阴离子）的染料结合染色。伊红Y是人工合成的酸性染料，在水中可离解为带负电荷的阴离子，该阴离子能与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合，使细胞浆着色。最终，细胞浆、红细胞、肌肉组织、结缔组织、嗜伊红颗粒等成分会被染成不同深浅的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
3. 分化作用
染色完成后，使用特定溶液去除组织上过多结合的染色剂，这一过程称为分化，所用溶液即为分化液。HE染色中常用0.5%盐酸乙醇作为分化液，其原理是酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离并褪色。经苏木精染色后，必须通过0.5%盐酸乙醇进行分化，去除细胞核上过量结合的苏木精染料以及细胞浆吸附的苏木精染料，再进行伊红染色，才能确保细胞核与细胞浆染色界限清晰。因此，分化是HE染色中至关重要的环节。
4. 返蓝作用
分化后，苏木精在酸性条件下呈红色离子状态，表现为红色；在碱性条件下则呈蓝色离子状态，表现为蓝色。组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后，会呈现红色或粉红色。因此，分化结束后，需立即用水冲洗组织切片以去除酸性物质，终止分化过程，再用弱碱性水（0.2%氨水）处理，使经苏木精染色的细胞核呈现蓝色，这一过程称为返蓝作用（又称蓝化作用）。此外，也可通过自来水浸洗实现细胞核返蓝，但所需时间相对更长。
实验步骤
实验结果展示
注意事项
1. pH值控制
若组织块在福尔马林中固定时间过长，会导致组织酸化，影响细胞核着色效果。针对这一情况，可延长组织块在自来水中的冲洗时间，或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30分钟，以确保细胞核着色更深。若伊红染色时细胞浆着色效果不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸进行调整。
2. 分色时间把控
分色是HE染色的关键步骤，需在显微镜下实时观察控制，理想状态为细胞核染色清晰、细胞质基本无色。若分色时间过长，会导致染色过浅，此时需重新染色后再进行分色操作。
3. 酒精脱水要求
酒精脱水必须彻底。若切片经酒精脱水后进入二甲苯时出现白色不透明现象，说明脱水不彻底，需将切片退回无水酒精中，更换酒精和二甲苯后重新处理，确保脱水与透明完全。此外，切片从二甲苯中取出或进入二甲苯前，需擦拭干净或吸干切片周边的多余水分。
4. 避免切片干燥
染色过程中需确保切片始终处于湿润状态，避免干燥。若切片干燥，会发生收缩、变形，影响神经元形态，进而干扰观察结果。
5. 避免切片污染
切片污染会导致污染物遮盖部分细胞或组织，影响其形态观察。因此，需定期过滤各类染液和试剂，以清除其中的沉淀物，避免污染产生。
6. 避免脱蜡不完全
冬季室温较低（14℃以下）时，需将二甲苯置于水浴锅中加温至30℃左右再进行脱蜡操作，以防止因脱蜡不完全导致染色不均匀、出现雾化现象。
7. 封片注意事项
最终封固时，需使用中性树脂，以防止切片日后褪色；盖片需选用面积大于组织块的规格，若组织块部分裸露，不久后会发生褪色；所用树脂浓度需适宜，封固过程中需避免产生气泡。
送样运输要求
1. 样本需置于20倍样本体积的固定液中固定24小时以上，采用常温运输送样。
2. 严禁固定时间过长，同时避免样本冷冻结冰。
