Masson染色

Masson染色技术原理与实验规范

一、 染色技术概述

Masson染色（丽春红酸性品红-苯胺蓝染色法）是检测动物组织中胶原纤维的常用染色方法之一。该方法可将胶原纤维染为蓝色，肌纤维与红细胞染为红色，能够有效区分胶原纤维与肌纤维，同时清晰显示各类组织中胶原纤维的含量及纤维化程度。

二、 技术原理

Masson染色中，胶原纤维可呈现蓝色（被苯胺蓝染色）或绿色（被亮绿染色），肌纤维则呈现红色（被酸性品红、丽春红染色），这一染色差异与阴离子染料分子大小及组织渗透性密切相关。具体而言，若将已固定的组织采用一系列阴离子水溶性染料依次或混合染色，可观察到：红细胞被最小分子的阴离子染料着色，肌纤维与细胞质被中等大小的阴离子染料着色，胶原纤维则被大分子的阴离子染料着色。

上述现象表明，红细胞对阴离子染料的渗透性最弱，肌纤维与细胞质次之，胶原纤维的渗透性最强。基于不同组织成分的渗透性能差异，选用分子大小不同的阴离子染料进行染色，即可实现对不同组织成分的精准区分与显示。

三、 实验步骤

四、 实验结果展示

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五、 常见问题及解决方案

（一） 染色易脱片

1.  原因：组织本身破碎或质地过硬等；解决方案：采用防脱载玻片进行制片。

2.  原因：脱水、透明处理不充分；解决方案：重新对组织进行脱水、透明及浸蜡处理。

3.  原因：脱水、透明处理过度；解决方案：先用酒精与甘油1:1混合液浸泡组织切面，再进行切片。

4.  原因：切片厚度不均；解决方案：调整切片参数，制备厚度均匀的切片。

（二） 切片染色不均

1.  原因：取材不规范或固定不彻底；解决方案：严格按照标准规范取材，确保组织固定充分。

2.  原因：脱水处理不充分；解决方案：重新进行脱水、透明及浸蜡处理。

（三） 切片染色模糊不清

1.  原因：包埋蜡温度过高；

2.  原因：分化处理过度；

3.  原因：脱水、透明处理不彻底。

六、 送样运输要求

1.  固定样本：将样本置于20倍样本体积的固定液中，固定24小时以上后常温运输送样。注意事项：严禁固定时间过长，避免样本冷冻结冰。

2.  切片样本：石蜡切片可常温运输；冰冻切片需在-20℃条件下运输。