免疫荧光染色

免疫荧光染色

以荧光抗体示踪或检测相应抗原的方法称为荧光抗体法；以已知荧光抗原标记物示踪或检测相应抗体的方法称为荧光抗原法。这两种方法统称为免疫荧光技术。由于荧光色素不仅可与抗体球蛋白结合，用于各类抗原的检测或定位，也能与其他蛋白质结合以实现抗体的检测或定位，但实际应用中荧光抗原技术极少使用，因此人们通常将其称为荧光抗体技术，或仍沿用免疫荧光技术的统称，其中荧光抗体法应用更为普遍。利用免疫荧光技术显示并检测细胞或组织内抗原、半抗原类物质的方法，称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。

该技术的核心特点为：特异性强、敏感性高、检测速度快。主要不足之处在于：非特异性染色问题尚未彻底解决，结果判定的客观性有待提升，且技术操作流程相对复杂。

根据反应体系及定量方法的差异，荧光免疫法可进一步细分出多种类型。与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，且多数操作简便易行，便于推广应用。国外生产的治疗药物监测（TDM）用试剂盒中，相当一部分属于此类技术，同时还有专门用于TDM荧光偏振免疫分析的自动分析仪投入生产。

技术原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于该反应具有高度特异性，当抗原与抗体发生特异性结合时，只需明确其中一种物质，即可检测出另一种物质。免疫荧光技术的核心原理，是将不影响抗原、抗体活性的荧光色素标记于抗体（或抗原）上，标记后的抗体（或抗原）与对应抗原（或抗体）结合形成复合物后，在荧光显微镜下可呈现特异性荧光反应，从而实现目标物质的定位与检测。

实验步骤